De 16 equinos mestizos de tiro, de ambos sexos, clínicamente sanos, se obtuvieron biopsias del músculo Gluteus medius a 3, 6 y 9 cm de profundidad, con el objetivo de evaluar su metabolismo anaeróbico y aeróbico, determinando las actividades de las enzimas creatinquinasa (CK), deshidrogenasa láctica (LDH) y citrato sintetasa (CS) en animales inactivos y trabajando en faenas agrícolas. El tejido muscular se homogeneizó, sonicó y centrifugó; posteriormente en el sobrenadante se determinaron las actividades enzimáticas en estudio. Los resultados obtenidos indican que la profundidad del tejido no afectó la actividad específica de CK, la actividad de LDH fue menor a 9 cm de profundidad en los equinos inactivos y la actividad de CS aumentó a mayor profundidad del tejido. Las actividades enzimáticas aumentaron por efecto del trabajo realizado por los animales. Estos resultados señalan que los equinos mestizos de tiro incrementan su metabolismo al realizar faenas agrícolas; sin embargo, utilizan preferentemente el metabolismo aeróbico, evitando el consumo de las reservas de glicógeno y la fatiga muscular