Se comparó la sensibilidad y especificidad del examen microscópico directo de fecas (tinción de Ziehl Neelsen), cultivo de fecas (Medio de Herrold Modificado) y un método serológico (ELISA) para el diagnóstico de Paratuberculosis bovina en 250 animales clínicamente sanos provenientes de 14 rebaños infectados. Las muestras de fecas fueron examinadas simultáneamente mediante cultivo y baciloscopía y las cepas aisladas fueron identificadas mediante la técnica de PCR. Para el diagnóstico serológico se utilizó un kit comercial de ELISA (IDEXX), utilizando un lector fotométrico a 620 nm con un punto de corte de DO 0.25. El 71.4% (10) de los rebaños y 16.0% (40) de las muestras resultaron positivos al cultivo. Al examen microscópico directo sólo se obtuvieron resultados sospechosos en 35 muestras (14.0%), de las cuales sólo 6 (17.0%) correspondieron a muestras positivas al cultivo (kappa: 0.013). El examen serológico detectó un 8.0% (20) de animales reaccionantes, con una sensibilidad de 32.5% y especificidad de 96.7% (kappa: 0.366). Los resultados obtenidos demuestran la conveniencia de utilizar simultáneamente cultivo de fecas y serología para la detección de animales infectados subclínicamente y la inconveniencia de usar el examen microscópico directo como método de diagnóstico de Paratuberculosis en animales asintomáticos