Se estudió la contribución de la fijación biológica de N2 (FBN) en cuatro leguminosas forrajeras, trébol blanco (Trifolium repens L.), trébol rosado (Trifolium pratense L.), trébol subterráneo (Trifolium subterraneum L.) y alfalfa (Medicago sativa L.), con y sin inoculación específica de rhizobio, mediante la metodología isotópica del Valor A, empleando tres gramíneas, avena (Avena sativa L.), ballica perenne (Lolium perenne L.) y festuca (Festuca arundinacea Schreb.) como cultivos de referencia. El estudio se llevó a cabo en un andisol (Typic fulvudand), en el Centro Regional de Investigación Carillanca, del Instituto de Investigaciones Agropecuarias, IX Región, Chile, durante tres temporadas. Las dosis aplicadas de N correspondieron a 10 kg ha-1 como sulfato de amonio (10% átomos exceso 15N) para las especies leguminosas y de 30 kg ha-1 como sulfato de amonio (5% átomos exceso 15N) para las gramíneas de referencia. En las muestras de material vegetal se analizó N total (Kjeldahl) y 15N (espectrometría de emisión óptica). Los tres cultivos de referencia mostraron estimaciones similares de la FBN en las leguminosas. La capacidad de FBN alcanzó el 90% en todas las temporadas y para todas las leguminosas. No se encontró efecto significativo respecto a la inoculación con rhizobium, excepto en alfalfa y sólo en la primera temporada. La cantidad de N fijado en todas las temporadas fue alta y con todas las leguminosas, variando entre 60 y 770 kg ha-1 año-1, para trébol subterráneo y alfalfa, respectivamente, ratificando la gran eficiencia del mecanismo de FBN en las leguminosas forrajeras en estudio.