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Cow oocytes evaluation for culture maturation

Evaluación de ovocitos de vaca para maduración en cultivo

Author
De los Reyes, M.

Aguayo, J.P

del Campo, H.

Barros, C.

Full text
https://avancesveterinaria.uchile.cl/index.php/ACV/article/view/9265
10.5354/acv.v14i1-2.9265
Abstract
Morphological characteristics previously determined in a non-invassive qualification pattern, were used to estimated the in vitro maturation of bovine oocytes. Follicles of 2 - 6 mm were aspirated from ovaries obtained from a slaughterhouse. By using of a stereoscopic microscope, oocytes were classified into 6 categories based on the appearance of their cytoplasm and presente or abstente of oocyte layers: 1 oocytes with a horogeneous granulate cytoplasm and totally surrounded by cumulus cells; 2 oocytes with a homogeneous granulate cytoplasm and parcially surrounded by cumulus cells; 3 oocytes with a homogeneous granulate cytoplasm and no cumulus cells; 4 oocytes with polarized cytoplasm and totally surrounded by cumulus cells; 5 oocytes with polarized cytoplasma and parcially surrounded by cumulus cells; 6 oocytes with polarized cytoplasm and no cumulus cells. Oocytes in each category were separately incubated in cultured medium TCM -199 for 24 hours at 39°C in air with 5% COZ and 98% humidity. Maturation was evaluated with a phase contrast microscope determinig nuclear maturation stages: germinal vesicle; germinal vesicle breakdown; formation of metphase l and II plates and oocyte degeneration. A total of 1206 in vitro cultured oocytes were studied. Oocytes categories 1 and 2 had the higher in vitro maturation rates, 75.3% and 68.6% respectively (p
 
Este trabajo estudió la maduración in vitro de ovocitos bovinos en relación a sus características morfológicas, previamente establecidas en un patrón no invasivo de clasificación. Se aspiraron folículos de 2 - 6 mm de ovarios de vacas de matadero. Los ovocitos se clasificaron en 6 categorías de acuerdo a las características citoplasmáticas y de las cubiertas ovocitarias mediante un microscopio estereoscópico: 1, ovocitos con citoplasma con granulado homogéneo y rodeado en su totalidad por una masa compacta de células del cúmulo; 2, ovocitos con citoplasma con granulado homogéneo y rodeado en forma parcial por células del cúmulo; 3, ovocitos con citoplasma con granulado homogéneo y desprovisto de células del cúmulo; 4, ovocitos con citoplasma polarizado y rodeado en su totalidad por células del cúmulo; 5, ovocitos con citoplasma pola­rizado y rodeado en forma parcial por células del cúmulo; 6, ovocitos con citoplasma pola­rizado y desprovisto de células del cúmulo. Cada categoría se incubó en forma separada depositando 10 ovocitos por gota de 50 tl de medio TCM-199, suplementado por 24 horas a 39°C en aire con 5% de CO7. La maduración de los ovocitos se evaluó con el microscopio de contraste de fases, observándose los estados de maduración nuclear: vesícula germinativa, desaparición de la envoltura nuclear, formación de placas metafásicas I y II y degeneración ovocitaria. Se estudió un total de 1206 ovocitos. Las categorías ovocitarias 1 y 2 fueron las que obtuvieron las mayores tasa de maduración in vitro, 75,3% y 68,6% respectivamente (p< 0,05). Las categorías 4 y 5 obtuvieron tasas de maduración de 55,5% y 47,2% respectivamente, no difiriendo entre ellas. Las categorías que obtuvieron las menores tasas de maduración en cultivo fueron la 3 y 6, con 34,95% y 30,97% respectivamente (p< 0,05), sin diferencias entre ambas. La viabilidad celular evaluada por FDA antes y después del cultivo fue de 80,7 y 77,15% respectivamente. Se concluye que la selección de los ovocitos previo a su cultivo, mediante técnicas no invasivas, incrementaría la tasa de maduración in vitro. En este sentido, un ovoplasma homogéneo y la presencia de varias capas compactas de células del cúmulo alrededor del ovocito, fueron las características morfo­lógicas que más influyeron en la maduración ovocitaria.
 
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