Nothofagus pumilio is the most important forest species in South Patagonia. The present work was carried out to determine the suitable cultural conditions for in vitro propagation through shoot culture of saplings and a mature tree. The days after sprouting and the presence of the bud scales were critical for culture initiation. A medium with a low salt concentration and the addition of glutamine, as Broadleaved Tree Medium, was suitable for shoot multiplication, being affected both by cytokinin and giberellin. A multiplication rate of 1:3-5 was obtained with 20­ 30 μM 2iP and 0.3 μM GA3 at day 63. No significant differences were found between the juvenile and adult material. Rooted shoots (60-70%) were obtained with 0.61-1.23 μM AIB and ten days darkness at the induction stage. Rooted shoots were then successfully acclimatised and 43.2% of good quality plants were obtained after 45 days.Nothofagus pumilio es la especie forestal más importante en Patagonia Sur. El objetivo de este trabajo fue establecer un protocolo de propagación in vitro a partir de brotes de renovales y un árbol adulto. El tiempo transcurrido desde la brotación del material vegetal y la presencia de las pérulas fueron críticos para la iniciación de los cultivos. Un medio con baja concentración salina adicionado con glutamina, como el Broadleaved Tree Medium, fue adecuado para la multiplicación de los brotes siendo ésta afectada por las citocininas y el ácido giberélico. Se obtuvo una tasa de multiplicación de 1:3-5 en un medio adicionado con 20-30 μM 2iP y 0.3 μM GA3 al día 63. No se encontraron diferencias significativas entre el material juvenil y el adulto. Un enraizamiento del 60-70% se obtuvo en un medio con 0.61-1.23 μM AIB y diez días de oscuridad en la etapa de inducción. Se obtuvo un 43.2% de plantas rusticadas de buena calidad después de 45 días de aclimatación.