El almacenamiento seminal in vitro ha contribuido a la reproducción de aves silvestres en cautiverio. Sin embargo es necesario predecir su capacidad fertilizante. Los indicadores de reacción acrosomal (RA) espermática se han relacionado con su capacidad fertilizante. Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad de reacción acrosomal in vitro en espermatozoides de halcón Harris, conservados en fresco y criopreservados. Se obtuvieron 64 eyaculados, los cuales fueron evaluados en fresco y posdescongelación, 32 se diluyeron con medio Beltsville Poultry Semen Extender (BPSE) y 32 utilizando medio Lake. Se evaluaron 64 eyaculados en fresco y posdescongelación; para la evaluación espermática básica se utilizó la tinción de eosina-nigrosina, y capacidad de RA fue mediante su inducción con membrana perivitelina (MPV). La movilidad espermática en semen fresco fue mayor (P<0,05) cuando se usó el medio BPSE (37,9±1,7) en comparación con el medio Lake (30,9±1,7). Sin embargo, la movilidad en ambos diluyentes disminuyó (P<0,05) posdescongelación. En semen fresco, el porcentaje de RA sin incubar con MPV fue mayor (P<0,05) con medio BPSE (14,1±1,7) al porcentaje con medio Lake (6,8±2,5). En semen descongelado los promedios de RA fueron similares (P>0,05). El porcentaje de espermatozoides con RA en el medio Lake, incubados con MPV posdescongelación (45,4±2,7), fue menor (P<0,05), comparado en fresco (55,3±3,1). Se concluye que el diluyente Lake fue más eficaz para la conservación en fresco y el diluyente BPSE para la criopreservación seminal de halcón Harris.Seminal storage, both fresh and cryopreserved, has contributed to the reproduction of wild birds in captivity, however, a method of predicting the fertilization capacity is needed. Indicators of the sperm acrosome reaction (AR) have been associated with its fertilization capacity. Therefore, the aim of this study was to evaluate the in vitro AR of fresh and cryopreserved Harris hawk sperm using Beltsville Poultry Semen Extender (BPSE) and Lake as diluents. 64 ejaculates were obtained and examined fresh and after thawing. The sperm basic evaluation for each ejaculate was made using eosin-nigrosin, while the ability of AR was assessed by co-incubation with perivitelline layer (PVL). Sperm motility of fresh semen was higher (P<0.05) in fresh semen in BPSE (37.9±1.7) than in Lake (30.9±1.7) diluent. However, the motility decreased (P<0.05) in both diluents after thawing. For fresh semen, the percentage of sperm that underwent an AR without incubation with PVL was higher (P<0.05) with BPSE (14.1±1.7) than with Lake (6.8±2.5) diluent, however, AR was similar between tow diluents (P>0.05) after thawing. The percentage of sperm that underwent an AR when incubated with PVL post thawing in Lake (45.4±2.7) was lower (P<0.05) than that of fresh semen (55.3±3.1), whereas there were no differences (P>0.05) with BPSE. It is concluded that Lake diluent was more efficient for fresh seminal storage, while BPSE diluent was more efficient for seminal cryopreservation in Harris hawk.