Leptospira spp. is a spirochete bacteria, causal agent of leptospirosis, zoonotic disease endemic in México that represents a serious public health and veterinary problem. Rodents are recognised as the most important reservoirs of this bacteria, which is transmitted mainly through direct or indirect contact with the Leptospira spp. excreted in the urine of infected individuals. The aim of this study was to evaluate the circulation of Leptospira spp. in urine samples of wild and synanthropic rodents from Yucatán, México. Eighty-four rodents were captured in the community of Cenotillo, Yucatán. Twenty-six urine samples were collected from the bladder and were used in the total DNA extraction. The identification of Leptospira spp. was intended through the polymerase chainreaction test in its endpoint variant. No evidence of Leptospira spp. was found in the urine samples. It is necessary to use other tissues for the identification of Leptospira spp., before concluding that the rodents used in the present study are not reservoirs of this bacteria.Leptospira spp. es una bacteria espiroqueta, agente causal de la leptospirosis, enfermedad zoonótica endémica en México que representa un serio problema de salud pública y veterinaria. Los roedores son reconocidos como los más importantes reservorios de la bacteria, la cual es transmitida principalmente por contacto directo o indirecto con Leptospira spp. contenidas en orinade individuos infectados. El objetivo de este estudio fue evaluar la circulación de Leptospira spp. en muestras de orina de roedores silvestres y sinantrópicos de Yucatán, México. Ochenta y cuatro roedores fueron capturados en la comunidad de Cenotillo, Yucatán. Se recolectaron 26 muestras de orina de la vejiga y fueron usadas en la extracción de ADN total. La identificación de Leptospira spp. se pretendió por medio de la prueba de reacción en cadena de la polimerasa en su variante punto final. No se encontró evidencia de Leptospira spp. en las muestras de orina. Es necesario emplear otros tejidos para la identificación de Leptospira spp. antes de concluir que los roedores usados en el presente estudio no son reservorios de esta bacteria.