At present, there is no information about Nothofagus fractioning and protein recovery from cutting crude extracts; necessary condition to, in vitro, demonstrate enzymatic activity with cofactors presence. Besides, this information is crucial to determine enzymatic expression levels, which in turn could allow to know physiological aspects of lenga (Nothofagus pumilio), cuttings which could be conditioning the poor results obtained in rooting treatments. To obtain information about what was pointed out above, a protocol which not only allows to separate phenol free proteins from crude extracts of lenga cuttings, but to determine its composition as well, was validated and standardized. From each of the 60 samples, 36 fractions were analyzed, obtaining, repetitively, phenol free proteins from fraction 14 on. The results obtained were statistically validated and show that the method employed allows to fractionate and to recover phenol free proteins from lenga cuttings through a Sephadex G-50 column (P < 0.05).Para Nothofagus spp. no existe a la fecha información acerca del fraccionamiento y recuperación de proteínas a partir de extracto crudo de estacas, condición necesaria para demostrar in vitro actividad enzimática en presencia de cofactores. Además, esta información es crucial para determinar los niveles de expresión enzimática, lo que permitiría conocer aspectos fisiológicos de las estacas de lenga (Nothofagus pumilio) que podrían estar condicionando la baja respuesta obtenida en los tratamientos de enraizamiento. Para obtener información acerca de lo señalado se validó y estandarizó un protocolo de fraccionamiento, el cual permitió separar proteínas libres de fenoles a partir de extracto crudo de estacas de lenga, como asimismo determinar su contenido. De cada una de las 60 muestras se analizaron 36 fracciones. A partir de la fracción 14 en adelante se obtuvieron proteínas libres de fenoles. Los resultados obtenidos se validaron estadísticamente y mostraron que la técnica permite fraccionar y recuperar proteínas libres de fenoles a través de columna Sephadex G-50 en estacas de lenga (P < 0,05).