The in vitro effect of levamisole (1, 10 and 100 ?g/ml) on cells of the innate immune response of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) was studied, particularly the activity of natural cytotoxic cells and macrophages present in peripheral blood. Levamisole effect on natural cytotoxic cells was evaluated by their capacity to lyse HL-60 tumor cells while activity of macrophages was evaluated measuring production of reactive oxygen species and nitric oxide. Results indicate that natural cytotoxic cells activity was significantly increased by 1 ?g/ml levamisole and that higher doses had no effect. On the other hand, reactive oxygen species and nitric oxide production by macrophages was not increased by any of the levamisole doses used and that the higher dose (100 ?g/ml) induced a significant decrease of nitric oxide levels, which might be deleterious for the defensive response of these fish.Se estudió el efecto in vitro del levamisol (1, 10 y 100 ?g/ml) sobre células de la respuesta inmune innata de trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss), particularmente la actividad de las células citotóxicas naturales y de los macrófagos presentes en sangre periférica. El efecto del levamisol sobre las células citotóxicas naturales fue evaluado mediante su capacidad para lisar células tumorales HL-60, mientras que la actividad de los macrófagos fue evaluado mediante la producción de especies reactivas del oxígeno y de óxido nítrico. Los resultados indican que la actividad de las células citotóxicas naturales fue incrementada significativamente por 1 ?g/ml levamisol mientras que dosis mayores no produjeron este efecto. Por otro lado, la producción de especies reactivas del oxígeno y de óxido nítrico por los macrófagos no fue incrementada por ninguna de las dosis usadas, sin embargo dosis de 100 ?g/ml indujeron una disminución significativa en los niveles de óxido nítrico, lo cual podría ser deletéreo para la respuesta defensiva de estos peces.