Glycerin is an organic compound with an alcoholic function and can be esterified into fatty acids to form triglycerides. Due to the increasing availability of glycerin, studies that determine the best level of its inclusion in diets for ruminants are needed. This study evaluated the effects of glycerin supplementation on the proximate composition and fatty acid profile of the longissimus lumborum of heifers fed on Brachiaria brizantha pasture. Thirty-six heifers were distributed in a totally randomized design with four treatments (G0.0 = without glycerin, G4.6 = 4.6% glycerin, G9.3 = 9.3% glycerin and G14.3 = 14.3% glycerin). The addition of glycerin decreased the tetradecanoic and octadecanoic fatty acids but increased the pentadecanoic, heptadecanoic, heptadecenoic, eicosanoic, eicosatetraenoic and docosatetraenoic fatty acids. The saturated (SFA), monounsaturated (MUFA) and omega-3 (n-3) fatty acid concentrations were similar across the diets. However, the polyunsaturated (PUFA) concentrations and the PUFA:MUFA and n-6:n-3 ratios increased with the inclusion of glycerin in the diet. Glycerin levels up to 14.3% (corresponding to a substitution of 50.5% of corn for this byproduct as an energy source) did not alter the proximate composition of the meat but improved the fatty acid profile of the longissimus lumborum muscle and, consequently, increased the meat quality, potentially providing benefits for human health.La glicerina es un compuesto orgánico con una función alcohólica que puede esterificarse en ácidos grasos para formar triglicéridos. Debido a su disponibilidad cada vez mayor, se necesitan estudios que indiquen el mejor nivel de inclusión en las dietas para los rumiantes. Este estudio evaluó los efectos de la glicerina sobre la composición próxima y el perfil de ácidos grasos de Longissimus lumborum de novillas suplementadas con pasto de Brachiaria brizantha. Se distribuyeron 36 vaquillas en un diseño totalmente aleatorizado con cuatro tratamientos (G0.0 = sin glicerina, G4.6 = 4,6% de glicerina, G9.3 = 9.3% de glicerina y G14.3 = 14.3% de glicerina). La adición de glicerina disminuyó los ácidos grasos tetradecanoico y octadecanoico, pero aumentó los ácidos grasos pentadecanoico, heptadecanoico, heptadecenoico, eicosanoico, eicosatetraenoico y docosatetraenoico. Las concentraciones de ácidos grasos saturados (SFA), monoinsaturados (MUFA) y omega-3 (n-3) fueron similares en todas las dietas. Sin embargo, las concentraciones de poliinsaturados (PUFA) y los niveles de PUFA: MUFA y n-6: n-3 aumentaron con la inclusión de glicerina en las dietas. Los niveles de glicerina hasta 14.3% (que corresponden a una sustitución del 50.5% de maíz por este subproducto como fuente de energía) no alteraron la composición proximal de la carne pero mejoraron el perfil de ácidos grasos del músculo Longissimus lumborum y, en consecuencia, aumentaron la carne calidad, potencialmente proporcionando beneficios para la salud humana.