Citrus tristeza virus (CTV) was reported in the 1960’s to affect Meyer lemon trees in Chile, but no field symptoms were observed. This study performed a complete biological, serological and molecular characterization of one hundred CTV isolates obtained from different hosts and geographical origins. Decline symptoms (DI) were not found on trees grafted onto sour orange. In Pica Oasis in northern Chile, stem pitting (SP) was found to affect grapefruit and Mexican lime trees. Most isolates present in the central area were considered mild (MCA-13-negative), while in the northern area aggressive isolates were observed and detected. Some of these isolates were capable of causing SP on grapefruit under field and greenhouse conditions and on sweet orange under greenhouse conditions. Almost all of these isolates were MCA13-positive and had nucleotide sequences associated with the VT genotype. El virus de la tristeza de los cítricos fue reportado el año 1960 afectando a árboles de limonero Meyer pero no se observaron síntomas a nivel de campo. Esta investigación tuvo como objetivo realizar una completa caracterización biológica, serológica y molecular de 100 aislados Chilenos de Citrus tristeza virus (CTV), previamente obtenidos desde diferentes hospederos y regiones geográficas. No se encontró síntomas de decaimiento (DI) en arboles injertados sobre naranjo amargo. En el Oasis de Pica, localidad de la zona norte de Chile, fue encontrada tristeza causando Stem pitting (SP) en árboles de pomelo y lima Mexicana. La mayoría de los aislados presentes en la zona central se consideraron leves (MCA-13 negativos), mientras que en la zona norte se observaron y se detectaron aislados agresivos, algunos capaces de causar SP en pomelo en condiciones campo e invernadero, y algunos capaces de causar SP en naranjo dulce bajo condiciones de invernadero, de los cuales casi todos fueron MCA-13 positivos y la secuencia de nucleótidos asociada al genotipo VT.