Toxicology rules are placing greater emphasis on the evaluation of risks posed by chemical substances on public and environmental health and with this goal, studies with animals have been used. Due to public and scientific pressure there is an increasing tendency to apply the principle of the three Rs in research with animals, fact observed in national legislations. All of this has promoted research on alternative methods different from traditional ones.In this review, the main alternative methods are shown with the goal to replace laboratory animals, to reduce their amount or to refine the techniques used in obligatory toxicology essays before new products are placed on the market.La toxicología reguladora ha puesto cada vez mayor énfasis en la evaluación de los riesgos que presentan las sustancias químicas sobre la salud pública y ambiental, para lo cual realiza ensayos con animales. Debido a la presión públicas y a la de los mismos científicos, existe una tendencia creciente a aplicar el principio de tres R en la investigación con animales, hecho que se manifiesta en las propias legislaciones de los países. Todo ello ha llevado a la investigación de métodos alternativos a los tradicionales.En esta revisión se muestran los principales métodos alternativos desarrollados con el fin de reemplazar a los animale de laboratorio, reducir su número o refinar las técnicas utilizadas en los ensayos toxicológicos obligatorios antes de la puesta en el mercado de nuevos productos.A toxicologia reguladora tem enfatizado sempre mais a avaliação dos riscos que apresentam as substâncias químicas sobre a saude pública e ambiental, para o qual realiza ensaios com animais. Devido à pressão pública e dos cientísta, existe uma tendência crescente de se aplicar este princípio dos tres R na pesquisa com animais, fato que se manifesta nas próprias legislações dos países. Tudo isto levou para a pesquisa, métodos alternativos em relação aos tradicionais. Nesta revisão são apresentados os principais métodos alternativos como objetivo de substituir os animais de laboratório, reduzir seu número ou aperfeiçoar as técnicas utilizadas nos ensaios toxicológicos obrigatórios antes de se colocar no mercado novos produtos.