Objetivou-se avaliar a viabilidade da produção de mudas de tomateiro por estaquia em diferentes substratos. O experimento foi conduzido em casa-de-vegetação no Centro de Ciências Agrárias da UFES, em Alegre-ES. Para a produção de mudas do tomateiro comparou se os substratos: mistura de solo + areia lavada + esterco bovino, Plantmax® e areia lavada. Os substratos foram acondicionados em recipientes plásticos ( 8 cm de altura e 7 cm de diâmetro), com capacidade para 200 mL. Brotações foram retiradas de diferentes posiçoes de plantas matrizes. Assim, as estacas foram padronizadas em tres alturas: 5, 8 e 11 cm . O experimento foi instalado em esquema fatorial 3 x 3 (substratos x estacas) com tres repetições e 30 mudas por parcela, totalizando 810 mudas. Foram detectados efeitos significativos para a interação entre os tipos de substratos e alturas de estacas nas seguintes características: comprimento do sistema radicular, diámetro médio das raízes, relaçáo entre a massa seca da parte aérea e massa seca do sistema radicular, massa seca total e massa seca do sistema radicular. Estacas de 5 cm apresentaram menor relação PA/SR independente do tipo de substrato e maior proporção de massa seca alocada no sistema radicular (53,8%). A propagado vegetativa do tomateiro é viável, contudo maiores estudos sobre substratos alternativos, condições de enraizamento e padrão do material vegetal utilizado devem ser realizados.