La presencia de residuos de medicamentos veterinarios en alimentos es una preocupación creciente para consumidores y para entes reguladores internacionales. Los límites máximos de residuos (LMR) en tejidos comestibles de origen animal son establecidos a partir del desarrollo de métodos analíticos. Se efectuó la validación del método de detección de ciprofloxacina (CFX), enrofloxacina (EFX) y balofloxacina (BFX) en músculo de pollos parrilleros por extracción en fase líquida y determinación simultánea por cromatografía líquida de alta presión (HPLC). Las muestras se homogenizaron y se adicionaron inicialmente con los antimicrobianos, luego se extrajeron con diclorometano dos veces. Estas fluoroquinolonas fueron cuantificadas por HPLC, detección por fluorescencia a 295 nm de excitación y 500 nm de emisión. El ensayo fue linear entre 0.001 y 0.1 µg/g. Los límites de cuantificación fueron 0.0119 µg/g para EFX, 0.0436 µg/g BFX y 0.0557 µg/g para CFX. Los índices de recuperabilidad de los metabolitos en músculo, entre 0.01 y 0.1 ug/g, calculados comparando las muestras inicialmente adicionadas contra muestras de músculo con incorporación de los antimicrobianos luego del procesado, promediaron los 77.47% para EFX, 87.7% para CFX y 96.67% para BFX. Los extractos eluidos no presentaron interferencias de la matriz biológica y tuvieron buena resolución de los analitos en los cromatogramas. Los LMR son establecidos a partir de los factores de riesgo, ensayos toxicológicos pertinentes y métodos de detección desarrollados y validados, los cuales deben ser factibles de implementación. Este es un método simple y económico para cuantificar la presencia simultánea de CFX, EFX y BFX en músculo de pollo.