The present study aims to explore the potential applications of Blepharocalyx cruckshanksii bark and leaf extracts as a cytotoxic agent against in vitro cancer cell lines (MCF-7, PC-3 and HT-29) by using sulforhodamine B (SRB) assay. The cytotoxicity assay revealed that the ethyl acetate extract from the bark exhibited marked anticancer activity. The active extract was subjected to liquid-liquid partitioning by using hexane and ethyl acetate to obtain fractions based on their polarity. However, Fraction 4 (F4) was identified as the most effective of the series by displaying against all cancer cell lines a cytotoxicity close to antineoplastic agents assayed. Then, F4 was analyzed by gas chromatography–mass spectrometry (GC-MS) to identify their major components and to relate these components to the cytotoxic effect. The results obtained indicated that B. cruckshanksii bark have excellent cytotoxic activity and warrant further studies to isolate novel compounds for chemotherapeutic use.El presente estudio tiene como objetivo explorar las posibles aplicaciones de los extractos de corteza y hoja de Blepharocalyx cruckshanksii como agente citotóxico contra líneas celulares de cáncer in vitro ((MCF-7, PC-3 y HT-29) mediante el uso de ensayo de sulforhodamine B (SRB). El ensayo de citotoxicidad reveló que el extracto de acetato de etilo de la corteza exhibía una actividad anticancerígena marcada. El extracto activo se sometió a un reparto líquido-líquido usando hexano y acetato de etilo para obtener fracciones basadas en su polaridad. Sin embargo, la Fracción 4 (F4) fue identificado como el más efectivo de la serie al mostrar contra todas las líneas celulares de cáncer una citotoxicidad cercana a los agentes antineoplásicos ensayados. Luego, F4 se analizó por cromatografía de gases-espectrometría de masas (GC-MS) para identificar sus componentes principales y relacionar estos componentes con el efecto citotóxico. Los resultados obtenidos indicaron que la corteza de B. cruckshanksii tiene una excelente actividad citotóxica y amerita estudios adicionales para aislar nuevos compuestos para quimioterapia.