Santiago Quiotepec, one of the oldest communities of the Tehuacán-Cuicatlán Valley (México), has a great tradition using medicinal plants. The aim of this study was to make an inventory of the medicinal species used by the inhabitants of Santiago Quiotepec and evaluate the antibacterial activity. An ethnobotanical study of medicinal plants was carried out, 60 informants mentioned that 66 species of plants are being used in the treatment of different diseases. Fifteen species were selected to evaluate the antibacterial activity in possible bacterial originated diseases treatment. The lowest values were presented in the hexane extract of Plumbago pulchella, with a MIC of 0.25 mg/mL over Staphylococcus aureus and S. epidermidis as well as the hexanic extract of Echinopterys eglandulosa showed a MIC of 0.25 mg/mL over Pseudomona aeruginosa.Santiago Quiotepec es una de las comunidades más antiguas del valle de Tehuacán-Cuicatlán (México), y tiene una gran tradición en el uso de plantas medicinales. El objetivo de este estudio fue realizar un inventario de las especies medicinales utilizadas por los habitantes de Santiago Quiotepec y evaluar la actividad antibacteriana. Se realizó un estudio etnobotánico de plantas medicinales, 60 informantes mencionaron 66 especies de plantas utilizadas en el tratamiento de diferentes enfermedades. Quince especies utilizadas en la comunidad para tratar enfermedades de posible origen bacteriano fueron seleccionadas para evaluar la actividad antibacteriana. Los valores más bajos se presentaron en el extracto hexánico de Plumbago pulchella, con una CMI de 0.25 mg/ml sobre Staphylococcus aureus y S. epidermidis, así como el extracto hexánico de Echinopterys eglandulosa mostró una CMI de 0.25 mg/mL sobre Pseudomona aeruginosa.