In this paper a protocol based on the application of Buffodine® disinfectant and a mix of antibacterials for obtaining rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) axenic fingerlings is described. This allowed to obtain and maintain axenic trout fingerlings for a period of 26 days. This time allow to achieve a gnotobiotic organism, a fundamental tool in studies of the understanding bacteria-host interaction or host-parasite interaction. El presente trabajo describe protocolo sobre la aplicación del desinfectante Buffodine® y un mix de antibacterianos para obtener alevines axénicos de trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss). Este protocolo permitió obtener y mantener alevines axénicos de trucha por un período de 26 días. Este período permite aplicaciones como ensayos con organismos gnotobióticos, una herramienta fundamental en los estudios para el entendimiento de la interacción bacteria-hospedero o parásito-hospedero.