El presente artículo se indaga por el lugar ocupado por el principio de separación de poderes dentro de las constituciones colombianas del siglo XIX. Para ello, se identifican las disposiciones constituciones que fueron expedidas durante este perido y que se refieren al principio separación de poderes, para luego contextualizarlas y evaluar su vigencia material. A partir de allí se sostiene que, si bien la consagración expresa de dicho principio en las cartas políticas constituye una constante del constitucionalismo colombiano del siglo XIX, no ocurre lo mismo con su vigencia material. Si bien este consta desde las primeras constituciones republicanas, su vigencia material solo tendrá lugar con las constituciones federales de mediados de siglo, proceso que se volverá a revertir con la entrada en vigencia de la constitución de la regeneración de 1886.