Febrile neutropenia (FN) is the most frequent hemato-oncological emergency, with high morbidi- ty and mortality in pediatrics. The objective of the study was the microbiological characterization and antimicrobial susceptibility of infections associated with FN in pediatric hemato-oncological patients. Patients and Method: Retrospective cohort study with patients aged between 1 month and 18 years, with onco-hematological pathology according to ICD-10 codes, hospitalized in a tertiary healthcare center in Bucaramanga, Colombia. Based on the medical records of the period 2013-2017, the episodes of FN were identified, and the isolated microorganisms and their susceptibility pattern were described. Biochemical identification and antimicrobial susceptibility testing were performed with the Dade Behring Microscan® automated system. The resistant microorganism classification was performed based on the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the interpretation of the laboratory according to the cut-off points of the Clinical and Laboratory Standards Institute recommendations. Results: Of 130 patients, 14.7% of the cultures obtained were positive. Bloods- tream infection was observed in 17.5% of the episodes. The isolated microorganisms were mainly Gram-negative bacteria (75.8%). Enterobacteriaceae (EB) were the most frequent, led by Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, followed by Pseudomonas aeruginosa and coagulase-negative Staphylo- cocci. Of the EBs, 40.5% showed resistance to Piperacillin/Tazobactam, 33.3% to Cefepime, and 8.2% to Meropenem. According to the antimicrobial resistance pattern, it was observed that 16.4% of the positive EB cultures had an extended-spectrum beta-lactamase pattern and 5% a pattern suggestive of carbapenemases. All Gram-positive cocci were sensitive to Vancomycin. Conclusion: In the studied patients, the predominant pathogenic microorganisms were Gram-negative ones with resistance in- dices similar to those of developing countries.La neutropenia febril (NF) es la urgencia hemato-oncológica de mayor frecuencia, morbilidad y mor- talidad en pediatría. Objetivo: Describir la caracterización microbiológica y de la susceptibilidad an- timicrobiana de las infecciones asociadas a NF en pacientes hemato-oncológicos pediátricos. Pacientes y Método: Estudio cohorte retrospectivo en pacientes entre 1 mes y 18 años de edad con patología onco-hematológica según códigos CIE-10, hospitalizados en un centro de tercer nivel de atención de Colombia. Basados en las historias clínicas del período 2013-2017 se detectaron los episodios de NF y se describieron los microorganismos aislados y su patrón de susceptibilidad. Las pruebas de identificación bioquímica y de susceptibilidad a los antimicrobianos fueron realizadas con el sistema automatizado Dade Behring Microscan®. La clasificación de microorganismo resistente se realizó teniendo en cuenta la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y la interpretación realizada por el laboratorio de acuerdo a los puntos de corte de las recomendaciones del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio. Resultados: De 130 pacientes el 14,7% de los cultivos obtenidos fueron positivos. Se documentó infección del torrente sanguíneo en el 17,5% de los episodios. Los microorganismos aislados fueron principalmente Bacilos Gram-negativos (BGN) (75,8%); las Enterobacterias (EB) fueron las más frecuentes, encabezadas por Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, seguidas de Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus coagulasa negativos (SCN). De las EB, el 40,5% mostraron resistencia a Piperacilina Tazobactam (TZP), 33,3% a Cefepime (FEP) y 8,2% a Meropenem (MEM). De acuerdo al patrón de resistencia antimicrobiana, se documentó que, de los cultivos positivos, el 16,4% de EB tenían patrón betalactamasas de espectro extendido (BLEE) y 5%, patrón sugestivo de carbapenemasas (PC). Todos los Cocos Gram-positivos (CGP) fueron sensibles a Vancomicina (VAN). Conclusión: En los pacientes estudiados, los microorganismos patógenos predominantes fueron los Gram-negativos con índices de resistencia similares a países en vías de desarrollo.