The aim of this study was to identify the chemical composition of the Piper arboreum Aubl. essential oil (EO), and to evaluate its inhibitory activity in vitro against the enzymes butyrylcholinesterase (BuChE) and acetylcholinesterase (AChE). The EO was obtained by steam distillation of the leaves, which were collected in Pindal canton of the Loja province in southern Ecuador. The chemical composition was analyzed using the gas chromatography technique coupled to a mass spectrometry detector (GC-MS) and gas chromatography coupled to a flame ionization detector (GC-FID). A total of 41 compounds were identified, the major components found in the oil were limonene (31,46%), β-selinene (12,01%), (E)-caryophyllene (7,53%), bicyclogermacrene (6,72%), germacrene D (3,83%) and β-elemene (3,63%). In in vitro analyzes, the EO showed high selective inhibition for BuChE with an IC50 inhibition value of 29,3 ± 3,3 μg/mL. By contrast, the EO was not active against the AChE enzyme (IC50 was 100,1 ± 15,2 μg/mL).El objetivo del presente estudio consistió en identificar la composición química del aceite esencial de la especie Piper arboreum Aubl. y evaluar su actividad inhibitoria in vitro frente a las enzimas butirilcolinesterasa (BuChE) y acetilcolinesterasa (AChE). El aceite esencial (AE) se obtuvo mediante destilación por arrastre de vapor de las hojas de la planta, que se colectaron en el cantón Pindal de la provincia de Loja al sur de Ecuador. La composición química se analizó mediante la técinica de cromatografía de gases acoplado a un detector de espectrometría de masas (GC-MS) y cromatografía de gases acoplado a un detector de ionización de llama (GC-FID). Se identificaron en total 41 compuestos, siendo los mayoritarios, el limoneno (31,46%), β-selineno (12,01%), (E)-cariofileno (7,53%), biciclogermacreno (6,72%), germacreno D (3,83%) y β-elemeno (3,63%). En los análisis in vitro, el AE mostró una alta inhibición selectiva para BuChE con un valor de inhibición CI50 de 29,3 ± 3,3 μg/mL. Por el contrario, el AE no resultó activo frente a la enzima AChE con un valor de inhibión CI50 = 100,1 ± 15,2 μg/mL.