Background: Microorganisms isolated from blood cultures (BC) in patients with febrile neutropenia (NF) vary over time, requiring systematic monitoring to guide appropriate empirical therapy. Aim: To identify microorganisms isolated from BC and their antimicrobial resistance profile in children with cancer and high risk NF. Method: Prospective, multicenter study. The analysis included episodes of high-risk FN with positive BC in children under 18 years of age treated in five hospitals in Santiago, Chile, 2012-2015. Results: A total of 206 microorganisms were analyzed in 185 episodes of high-risk FN. The main isolates were Gram negative bacilli (46.6%) and Gram positive cocci (45.1%) and the most frequent microorganisms were Escherichia coli (22.8%), coagulase negative Staphylococcus (18.0%) and Klebsiella spp. (16.5%). Escherichia coli and Klebsiella spp showed 4.2% and 67.6% resistance to third generation cephalosporins (cefotaxime/ceftriaxone), 10.6% and 40.6% resistance to fluoroquinolones (ciprofloxacin) and 2.1% and 26.5% to amikacin, respectively. Coagulase negative Staphylococcus and Staphylococcus aureus had 86.4% and 22.2% resistance to oxacillin, Streptococcus viridans group had 71% resistance to penicillin. Discussion: This study updates the etiology and resistance profile of microorganisms isolated in BC from children with cancer and high risk FN, an essential tool for the adequate management of these patients.Antecedentes: Los microorganismos aislados de hemocultivos (HC) en pacientes con neutropenia febril (NF) varían en el tiempo, siendo necesaria su vigilancia para orientar una terapia empírica adecuada. Objetivo: Identificar microorganismos aislados de HC y su perfil de resistencia (R) a antimicrobianos en niños con cáncer y NF de alto riesgo. Método: Estudio prospectivo, multicéntrico de episodios de NF de alto riesgo en pacientes bajo 18 años de edad, de cinco hospitales en Santiago de Chile, 2012-2015. Análisis de HC positivos. Resultados: Se analizaron 206 microorganismos en 185 episodios de NF de alto riesgo con HC positivos. Los aislados principales fueron bacilos gramnegativos (BGN) (46,6%) y cocáceas grampositivas (CGP) (45,1%) y los microorganismos más frecuentes Escherichia coli (22,8%), Staphylococcus coagulasa negativa (18,0%) y Klebsiella spp (16,5%). En resistencia (R) a antimicrobianos destaca: E. coli y Klebsiella spp 4,2 y 67,6% R a cefalosporinas de tercera generación (cefotaxima/ceftriaxona) respectivamente, 10,6 y 40,6% R a ciprofloxacina y 2,1 y 26,5% a amikacina, respectivamente. S. coagulasa negativa y S. aureus 86,4% y 22,2% R a oxacilina, Streptococcus grupo viridans 71% R a penicilina. Discusión: Este estudio actualiza la etiología y el perfil de R de microorganismos aislados en HC de niños con cáncer y NF de alto riesgo, herramienta esencial para el adecuado manejo de estos pacientes.