Para optimizar las técnicas de reproducción en cautiverio de lenguado Paralichthys adspersus; se elaboró una metodología para la criopreservación de sus espermatozoides. Para ello, se evaluó el efecto del dimetil sulfóxido (DMSO) como agente crioprotector en tres concentraciones diferentes (1,0; 1,5 y 2,0 M) sobre la motilidad espermática y su posterior congelación con cinco diferentes tasas: -7,5; -10; -12,5; -20 y -30°C min-1, utilizando un congelador automático programable. Los mayores porcentajes de motilidad espermática post congelamiento-descongelamiento (40,5 ± 13%) fueron obtenidos al utilizar una tasa de -10°C min-1 y DMSO sin encontrar diferencias significativas entre las tres diferentes concentraciones de DMSO (P < 0,05). Posteriormente, se evaluó el efecto de un crioaditivo no permeable (vitelo de huevo de gallina o VHG), para determinar si era posible incrementar los porcentajes de motilidad espermática. Se utilizó una solución crioprotectora compuesta por DMSO, en cada una de las tres concentraciones diferentes, adicionando VHG al 10% v/v. Los mayores porcentajes de motilidad espermática (71,71 ± 13%) también se obtuvieron a la tasa de congelamiento de -10°C min-1, sin encontrar diferencias significativas entre las concentraciones de la solución crioprotectora en la cual fue incubada la muestra de espermatozoides (P < 0,05). Al comparar los porcentajes de motilidad espermática post-descongelación utilizando el crioprotectante DMSO, se obtuvieron diferencias significativas cuando se agregó VHG.